Bakteeri-infektioiden moninaisuus edellyttää patogeenin selkeää tunnistamista ja sen lajin määrittelyä. Mikro-organismin tyypin määrittämisessä mikrobiologeja auttavat sen väriominaisuudet - mikrobin herkkyys värjäytymiselle erilaisilla väriaineilla. Tämän menetelmän avulla voit tutkia patogeenin morfologiaa. Bakteerien sävyominaisuudet ovat erittäin tärkeitä mikrobiologian alan käytännön ja teoreettisen tutkimuksen kann alta.
Mikrobitutkimus
Bakteriologiassa on monia menetelmiä mikro-organismien värjäykseen. Kaikki ne perustuvat bakteerien väriominaisuuksiin. Värjäyksen avulla voit määrittää niiden muodon, rakenteen, koon ja suhteellisen sijainnin. Tämä mahdollistaa yleisen biologian ja vertailevan mikrobiologian mikro-organismityyppien systematisoinnin ongelmat.
Miksi maalata ne
Bakteerit ovat käytännössäläpinäkyviä organismeja, ja ilman värjäystä ne näkyvät huonosti tavanomaisessa mikroskopiassa. Esineiden tutkimiseen voidaan käyttää erikoismikroskopiaa (faasikontrasti, tumma kenttä), mutta helpoin tapa on värjätä, jonka jälkeen bakteerit tulevat näkyviin tavanomaisessa valomikroskoopissa.
Näytteen valmistelu
Käytetystä värjäystekniikasta riippumatta on olemassa yhtenäiset säännöt tutkittavan kohteen valmistelulle. Seuraavat vaiheet ovat pakollisia:
- Steriilit instrumentit tekevät tahraa lasilevylle.
- Näytettä kuivataan. Tämä tehdään huoneenlämmössä tai kuivauskaapeilla.
- Seuraa kiinnitysvaihe - mikro-organismit kiinnitetään lasiin erityisillä yhdisteillä.
- Oikea värjäys - näyte peitetään väriaineella määrätyn ajan, jonka jälkeen se pestään pois.
- Lopullinen kuivaus - näyte kuivataan uudelleen.
Yleisimmät väriaineet
Yleimmin käytetyt väriaineet perustuvat aniliiniin, jolla on erilaiset happoarvot (pH). Useimmat väriaineet ovat jauheita, jotka on laimennettu alkoholiin.
Väriaineita, joissa kationit ovat väriaineita, kutsutaan emäksisiksi (pH yli 7). Niitä voidaan käyttää mikro-organismien värjäämiseen punaisella (magenta, safraniini), violetilla (metyylivioletti, tioniini), sinisellä (metyleenisininen), vihreällä (malakiitinvihreä), ruskealla (krysoidiini) ja mustalla (induliini).
Väriaineita, joissa väriaineet ovat anioneja, kutsutaan happamiksi (pH alle 7). Ne värjäävät näytteen punaiseksi (eosiini), keltaiseksi (pikriini) tai mustaksi (nigrosiini).
On ryhmä neutraaleja väriaineita (esim. rodamiini B), joissa sekä kationit että anionit toimivat väriaineina.
Kulttuuri kuollut tai elossa
Värjäysmenetelmät on jaettu kahteen ryhmään koenäytteen elämänmuodon mukaan.
- Elinikäinen värjäys. Tätä menetelmää mikro-organismien ominaisuuksien tutkimiseksi käytetään elävien kudosten tutkimuksessa, mikä mahdollistaa mikrobien elintärkeiden prosessien tarkkailun. Tässä värjäyksessä käytetään värejä, joilla on alhainen myrkyllisyys ja korkea tunkeutumiskyky.
- Postvitaalinen värjäys. Tämä on kuolleiden tai tapettujen mikro-organismien värjäys. Bakteerien väriominaisuuksien ansiosta mikrobiologit määrittävät niiden rakenteen. Juuri tätä värjäystä käytetään laajimmin.
Grampositiivinen ja gramnegatiivinen
Juuri nämä bakteerien ominaisuudet löytyvät eri lääkkeiden ohjeista. Tämä menetelmä bakteerien sävyjen ominaisuuksien tutkimiseksi perustuu gentianviolettivärin ja jodikiinnityksen käyttöön. Tämä on tanskalaisen lääkärin Hans Christian Gramin tekniikka, joka ehdotti sitä vuonna 1884. Tämän värjäyksen seurauksena bakteerit jaetaan kahteen ryhmään:
- Gram (+) - muuttuu siniseksi(stafylokokit ja streptokokit).
- Gram (-) - tahraa vaaleanpunaisesta punaiseen (enterobakteerit, salmonella, E. coli).
Erilaiset värjäystulokset johtuvat bakteeriseinämien erilaisista sävyominaisuuksista. Gram-värjäysmenetelmä on edelleen pääasiallinen joidenkin tartuntatautien diagnosoinnissa.
Muut värjäystekniikat
Karakterisoidaan vielä muutama bakteriologiassa yleisesti käytetty menetelmä.
- Ziehl-Nelsonin menetelmä - määrittää bakteerien happoresistenssin. Se tunnistaa tuberkuloosin ja mykobakterioosin aiheuttajat.
- Romanovsky-Giemsa-tekniikka - värjää asidofiiliset (etikkahappo ja maitohappo) bakteerit punaiseksi ja basofiiliset (spirokeetat ja alkueläimet) siniseksi.
- Morozovin tekniikka - värjää bakteerit ruskeiksi ja tekee niiden siimot näkyväksi.
Itiöt näkyvät
Tsielin fuksiinivärjäyksen avulla voit nähdä bakteeri-itiöitä. Koska ne ovat vaaleanpunaisia värjäyksen jälkeen, ne ovat selvästi näkyvissä sinisten bakteerien taustalla. Tämä menetelmä on myös bakteriologian työkalu ja sillä on suuri käytännön merkitys.
